Exigences d'enregistrement des sporicides

Les sporicides sont utilisés sur des surfaces et objets durs, non poreux et inertes afin d'éliminer les spores. Les spores bactériennes font partie des formes de vie microbienne les plus difficiles à combattre.

L'EPA américaine exige que les données d'efficacité soient obtenues dans des conditions d'essai contrôlées afin que les produits antimicrobiens puissent prétendre être sporicides. Pour obtenir des données d'efficacité sporicide, il convient de suivre la méthode officielle AOAC 966.04 d'activité sporicide des désinfectants. Pour pouvoir dire qu'un produit liquide élimine les spores sur une surface dure et non poreuse, il faut exposer 60 conteneurs de pénicylindres en acier inoxydable inoculés avec des spores de Bacillus subtilis (ATCC 19659) et de Clostridium sporogenes (ATCC 3584) au sporicide. Il faut tester trois lots du produit au niveau LCL des ingrédients actifs indiqués sur la fiche CSF du produit. Outre cette norme, un sporicide doit également prouver une absence de croissance (élimination totale) sur 60 conteneurs (30 conteneurs par organisme par lot) lors d'un test de vérification. Les tests de vérification doivent être effectués dans un autre laboratoire, ou par une autre équipe.

En Europe, les fabricants effectuent des tests de suspension conformément à la méthode EN13704 afin de pouvoir déclarer une activité sporicide. Pour prétendre être sporicide, une réduction de >3 log de Bacillus subtilis (ATCC 6633) doit être enregistrée suite à un temps de contact de 60 minutes ou moins.

La dernière version de la norme EN13704, de 2018, comprend une série de modifications par rapport à la version précédente de 2002, dont des changements en termes de préparation des spores et de tests de susceptibilité des organismes d'essai. 

Selon la norme EN13704, la préparation des spores requiert que 80 % des cellules végétatives sporulent, tandis que la norme AOAC 966.04 requiert que 95 % des cellules végétatives sporulent.  Après la préparation de la suspension de spores, la norme EN13704 demande un test de susceptibilité afin de vérifier la performance de la suspension de spores face à deux biocides standard, le glutaraldéhyde et l'acide peracétique. Les tests utilisent deux concentrations, une faible et une élevée, par biocide. Pour répondre aux critères de la norme EN13704, la suspension de spores doit survivre (réduction de <3 log) à la faible concentration et être éliminée (réduction de >3 log) à concentration élevée. Selon la norme AOAC 966.04, il faut effectuer un test de résistance à l'acide hydrochlorique pour vérifier la performance de la suspension de spores face à 2,5 M HCl. Pour répondre aux critères de la norme AOAC 966.04, les spores doivent résister à 2,5 M HCl pendant 2 minutes ou plus.

L'usage de suspensions de spores dans le test sporicide AOAC, et la préparation minutieuse des suspensions de spores de la norme EN13704 garantissent que les produits qui prétendent être sporicides sont soumis à des essais d'efficacité rigoureux.

Efficacité sporicide de composé d'ammonium quaternaire

Les composés d'ammonium quaternaires (QAC) sont des agents tensioactifs cationiques très actifs contre les microorganismes, bien qu'ils soient généralement plus efficaces contre les bactéries Gram-positives à faible concentration que les bactéries Gram-négatives. Ils sont considérablement moins efficaces contre les sporogènes³. 

De nombreux biocides sont bactéricides ou bactériostatiques à faible concentration pour les bactéries non-sporulantes, dont les cellules végétatives de Bacillus et Clostridium. Certains biocides en forte concentration peuvent avoir une action sporicide (comme le glutaraldéhyde et les CRA). 

Cependant, même à forte concentration, l'alcool, les phénoliques, les QAC et la chlorhexidine ne sont pas sporicides (bien que ce soit possible pour la chlorhexidine à haute température)⁴. 

Les QAC sont sporostatiques ; ils empêchent l'excroissance des spores (le développement d'une cellule végétative à partir d'une spore germinée) mais ils n'affectent pas le processus de germination (le passage de l'état dormant à un état métaboliquement actif)².

Il est probable que les QAC présentent un certain degré d'efficacité contre les cellules végétatives de Bacillus et de Clostridium. Cependant, les QAC ne sont pas capables d'éliminer les spores.

Pour qu'un produit puisse prétendre être sporicide, les essais doivent être réalisés au niveau des spores, et non des cellules végétatives. Pour maintenir le contrôle en environnement de salle propre, il faut utiliser des agents biocides démontrant une activité sporicide face aux spores.

[1] McDonnell, G, Russell AD. Antiseptic and Disinfectant: Activity, Action and Resistance. Clin Micrbiol. Janv. 1999 ; 12(1):147-179.
[2] Russell AD. Bacterial spores and chemical sporicidal agents. Clin Microbiol Rev. Avr. 1990 ; 3(2):99-119.
[3] Sandle, T. The CDC Handbook: A Guide to Cleaning & Disinfecting Cleanrooms. 1–27.
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores. Int J Pharm. 1986;34:51-56.